Jensen Ross Ackles est né le 1er mars 1978 à Dallas, au Texas. Il est né d'un père acteur, Alan Ackles ainsi que d'une mère nommée Danna Joan Shaffer. Jensen a ainsi des origines allemandes par sa mère mais également irlandaises et anglaises. Pour la petite anecdote, ses parents ont mis trois jours à décider du nom de leur deuxième enfant, préférant choisir un nom qui sortirait de l’ordinaire. C'est un jour alors qu'ils allaient à l'église, qu'ils entendirent le prénom d'une des personnes présentes ce jour-là et qui se prénommait  Jensen. C'est ainsi que leur cœur alla vers ce prénom.
Jensen n'est pas l'aîné de la famille Ackles et a un grand frère, Joshua, qui a quatre an de plus que lui, et une petite sœur qui se nomme Mackenzie, plus jeune de six ans.

Jensen a été immergé très tôt dans le milieu artistique, puisque dès l'âge de deux ans, le bambin se voit poser pour des photographes, débutant ainsi très jeune une carrière de mannequinat qu'il va poursuivre jusqu'à l'âge de dix ans. Toutefois, comme tout enfant de son âge, Jensen a dû aller à l'école et c'est ainsi qu'il étudia à l'école élémentaire de Dartmouth Elementary School en 1990 avant d'intégrer le lycée Apollo Junior High School en 1993 puis d'aller au L. V. Berkner à Richardson en 1996 d'où il ressort diplômé. Durant son parcours scolaire au lycée, il intégra l'équipe de lacrosse et de baseball. Il y a également pris de cours de théâtre, de guitare et de chant. Après le lycée, il prévoyait d’entrer à l’université et ensuite de devenir, une fois son diplôme en poche, kinésithérapeute, seulement il décida de suivre une autre voie : celle de devenir acteur, ce qui le força à déménager à Los Angeles. Le jeune acteur obtint un rôle dans la série Dark Angel, aux côtés de Jessica Alba, ce qui le fit remarquer du public puis sa carrière d'acteur se lança notamment avec son rôle dans la série Dawson, malgré les autres petits rôles qu'il eut à côté. Il intégra par la suite l'équipe de Smallville où il avait d'abord passé une audition pour interpréter Clark Kent mais dont le rôle avait été finalement attribué à Tom Welling. Il n’eut aucun regret, déclarant même que Tom était la personne faite pour ce rôle et qu’il n’aurait imaginé personne d’autre pour le remplacer, pas même lui. Cependant, les producteurs de Smallville le rappelèrent quelques années après et il décrocha tout de même un rôle dans la série, y interprétant Jason Teague, le petit-ami de Lana Lang. Par la suite, il obtint d'autres rôles et notamment en 2005, aux côtés de don père, Alan Ackles, dans le film "Devour". C'est également cette même année qu'il obtint le rôle de Dean Winchester dans la série Supernatural dont il est encore aujourd'hui l'acteur principal. Il s’est lancé dans une entreprise familiale : une brasserie à Dripping Springs. Concernant sa vie privée, il s’est marié à Danneel Harris en 2010, avec qui il a eu trois enfants : une petite fille Justice Jay en 2013, et des jumeaux, Zeppelin Bram et Arrow Rhodes en 2016. Quelques semaines après la naissance de ses enfants, Jensen a commis une faute dont il se sent affreusement coupable. Ne pouvant plus le supporter, et sa nature à éviter les problèmes plutôt que de les confronter ayant pris le dessus, il s’est enfui à Astoria, ne laissant que quelques vulgaires notes à sa femme.

Décrivez« Si je dois décrire Jensen en trois mots ? Impossible. C’est mon pote Jensen, et surtout, il serait capable de me frapper à la sortie de l’interview parce que j’aurais raconté n’importe quoi sur lui. Donc vous n’entendrez de ma bouche que de bonnes choses, parce que je tiens à ma vie (et parce qu’elles sont plutôt vraies. C’est un ami loyal, sur qui on peut compter. Il est toujours là, peu importe l’heure à laquelle on l’appelle. Il répond toujours présent, bien qu’il râlera sûrement un peu si vous l’appelez à quatre heures du matin, juste pour parler. En revanche, il ne dit jamais non pour sortir et même passer une soirée affalé sur le canapé à boire une bonne bière. Il ne reste que très rarement en place, tous les prétextes sont bons pour sortir boire un café ou bien un verre. Mais il lui arrive de passer des dimanches après-midis sur son canapé, pantoufles aux pieds. Croyez-moi, ses pantoufles ne sont pas belles à voir. C’est un véritable bout en train, même s’il peut être un véritable râleur quand il n’a pas encore pris son café ou bien qu’il s’est levé du mauvais pied. Un Ackles en rogne est un Ackles à éviter, mais vous pouvez toujours l’appâter avec quelques gâteaux, peut-être qu’il s’adoucira. » – Jared Padalecki.

« C’est un mec amical, qui a un sens de l’humour, certes parfois particulier, mais on ne le refait pas. Il adore rire, et passe ses journées à faire rire. Le passe-temps préféré des  J² est de faire blagues et je suis souvent la cible de leurs farces. Quelques-uns de ses défauts ? Laissez-moi réfléchir, parce qu’il y en a en pagaille. Je dirais qu’il est assez rancunier ; je me souviens d’une histoire où un ancien ami à lui lui avait fait une crasse, il ne lui a pas parlé pendant plusieurs semaines, jusqu’à ce que l’autre vienne s’excuser et une fois ceci fait, il a cessé de bouder mais il lui arrive de lui lancer des pique là-dessus. Ah oui, je ne sais pas si je l’ai précisé, mais Ackles est fier comme un pou, vous touchez son égo et il se met à bouder. Il peut être très têtu aussi. »  – Misha Collins.

« Ackles me ressemble sur un point particulier : il est très protecteur avec ses amis et sa famille. Ses enfants sont la prunelle de ses yeux et il leur est totalement dévoué. Par contre, là où il ne me ressemble pas c’est que c’est une personne très ponctuelle, il n’arrivera que très rarement en retard et si c’est le cas, attendez-vous à ce qu’il râle car il déteste ça. Un autre point sur lequel nous sommes différents : c’est un sportif. Il adore le football, lacrosse, le baseball et le basketball. Il s’entretient, mais il faut dire qu’il aime plaire aussi. » – Mark Sheppard.

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